Detección fluorimetrica de la hibridación de ácidos nucleicos en medios homogéneos

Abstract

Las sondas de ADN y ARN poseen un gran potencial de aplicaciones. Una sonda ideal de ADN debe ser aquella que experimenta un cambio mensurable en algún parámetro característico cuando hibrida con la secuencia diana. Ya que la radioactividad o la actividad enzimática no varían tras la hibridación, se deben realizar complejos procesos para separar la sonda libre de la hibridada. En contraste, las técnicas fluormétricas que utilizan fluoróforos enlazados a ADN pueden permitir análisis con empleo de reactivos más sencillos y baratos, con mayor tiempo de validez y con la gran ventaja de efectuarlos en medios homogéneos. Al objeto de diseñar sondas fluorimétricas de ADN en medios homogéneos, en este proyecto se ha planteado el estudio de los cambios que experimentan las propiedades fluorescentes del ácido polirribocitidílico marcado con pireno, cuando hibrida con un homopolinucleótido complementario, el ácido polirriboinosínico. Estos polinucleótidos sinteticos se han escogido como modelos de ácidos nucleicos por su fácil manejo y adquisición. Una vez establecidas las condiciones analíticas más favorables , se marcarán fragmentos de ADN, para comprobar la utilidad de la etiqueta fluorescente en la detección de un sistema natural