Localización de epítopos en distintos antígenos de Leishmania infantum. Aplicación en el desarrollo de un sistema de diagnóstico serológico

Abstract

En este trabajo se describe la caracterización de cinco proteínas antigénicas de Leíshmania infantum, el agente etiológico de la leishmaniosis visceral canina en España. Las proteínas aisladas fueron dos histonas, la H2A y la H3, y tres proteínas ribosomales de la familia de las proteínas ácidas, la LiP2a, LiP2b y LiPO. Todas ellas se caracterizaron tras el aislamiento de los genes que las codificaban en forma de cDNAs contenidos en librerías construidas en fagos egtll. El aislamiento se llevó a cabo tras rastrear las librerías con sueros obtenidos de perros infectados de forma natural por el parásito. El análisis de secuencia mostró que aunque estas proteínas en Leishmania poseían un carácter conservado existían regiones donde aparecían secuencias específicas para el parásito. Precisamente fue en estas regiones donde se localizaron los determinantes antigénicos de las diferentes proteínas. Con el fin de desarrollar un sistema de diagnóstico serológico de la leishmaniosis canina, las regiones antigénicas de las cinco proteínas fueron expresadas y purificadas como polipéptidos recombinantes. La utilización de estos antígenos recombinantes en ensayos de ELISA demostró la potencialidad del uso de estas proteínas para el desarrollo de sistemas de diagnóstico serológico sensibles y específicos de la leishmaniosis canina.

In this work we describe tbe characterization offive antigenic proteins of Leishmania infantum, parasite whose infection cause 'canine visceral leishmaniosis in Spain. The following antigenic proteins were cbaracterized: tbe histones H2A and H3, and three members of tbe acidic ribosomal protein family, LiP2a, LiP2b and LiPO. All of tbem were isolated after isolation of tbeir cDNAs by immunoscreening of aL. infantum egtll expression library witb tbe sera from dogs nattirally infected witb tbe parasite. Aminoacid sequence analysis showed that alI of them were conserved relative to the eukaryotic equivalent proteins but also that they possessed divergent regions. Epitope mapping demonstrated that the antigenic determinants were always located in these specific regions of the parasite proteins. In order to develop a serodiagnosis test for canine leishmaniasis these antigenic regions were expressed and purified as independient polypeptides. The usefulness of these recombinant proteins in ELISA assays for canine leishmaniasis diagnosis has been analyzed.