Generación y caracterización de un modelo lesional corneal ex vivo para su uso en ingeniería tisular

Abstract

Objetivos: En el presente estudio se pretende generar y caracterizar un modelo lesional corneal ex vivo, con el fin de poder evaluar la viabilidad de los tejidos artificiales creados mediante Ingeniería Tisular a través de la aplicación de una causticación controlada con NaOH sobre córneas de cerdo. Métodos: Se llevó a cabo un estudio descriptivo tomando 18 ojos de cerdos adultos, inmediatamente después de morir. Los globos oculares se introdujeron en NaOH 1,5 M durante 1, 2, 3 y 5 minutos. Tras lo cual se lavaron con agua corriente (5 minutos) y se realizó un lavado rápido con PBS, seguido de un lavado de 2 minutos en PBS. Se incluyeron dos grupos control: uno de córneas no tratadas, y otro de córneas a las que se les realizó lavados de agua corriente y PBS. Las muestras fueron procesadas para el análisis histológico mediante microscopía óptica con las tinciones de hematoxilina eosina, picrosirius y azul alcian. Se determinó la significación de los resultados obtenidos mediante el análisis estadístico ANOVA. Resultados: Se observó una pérdida del endotelio y del epitelio corneal en todos los grupos tratados con NaOH. Asimismo se objetivó una tendencia a la compactación de las fibras colágenas tras el tratamiento con NaOH en la tinción de picrosirius y la pérdida de fibras de coloración verde en las muestras tratadas con NaOH con respecto a los controles. Pese a observarse una menor intensidad en la tinción de azul alcian en la región posterior con respecto a las otras dos y entre las distintas muestras tratadas con NaOH, no se encontraron diferencias significativas en este aspecto. Conclusiones: se ha logrado crear un modelo lesional sencillo, de bajo coste y que no implica problemas éticos, que permitiría evaluar los tejidos artificiales creados mediante Ingeniería Tisular.

Purpose: This study aims to generate and characterize an ex vivo corneal injury model, in order to assess the feasibility of artificial tissues created by using tissue engineering through the application of a corneal alkali burn with NaOH on porcine corneas. Methods: We conducted a descriptive study taking 18 eyes of adult pigs immediately after their death. Eyes were introduced on 1.5M NaOH for 1, 2, 3 and 5 minutes. After, they were washed with running water (5 min) and rapid washing with PBS, followed by a 2 minute wash in PBS was performed. Two control groups were included: untreated corneas and another corneas were performed running water washes and PBS whashes. Samples were processed for histological analysis by light microscopy with hematoxylin and eosin, alcian blue and picrosirius staining. The significance of the results was determined by ANOVA statistical analysis. Results: We observed a loss of endothelium and the corneal epithelium in all groups treated with NaOH. A tendency to compaction of collagen fibers after treatment with NaOH and picrosirius stain loss of green coloration fibers in samples treated with NaOH with respect to controls was also observed. Despite lower intensity observed in alcian blue staining in the posterior region compared to the other two and between samples treated with NaOH, no significant differences were found in this area. Conclusions: it has created a single lesion model, low cost and does not involve ethical issues, to assess the tissue created by Tissue Engineering.