Polynucleotide for safer and more effective immunotherapies

Abstract

N.º de publicación WO/2020/099572 Fecha de publicación 22.05.2020 Nº de la solicitud internacional PCT/EP2019/081346 Fecha de presentación internacional 14.11.2019 Solicitante: Fundación Pública Andaluza Progreso y Salud

Hemos generado vectores lentivirales (LV) específicos que expresan un receptor de antígeno quimérico (CAR) bajo diferentes promotores. En particular, hemos probado LVs que impulsan la expresión de CAR mediante el uso del promotor AWE, que contiene un fragmento de 387 pb del promotor alternativo de WAS inmediatamente "aguas arriba" del promotor proximal de WAS de 500 pb presente en el vector WE (SEQ ID NO 1). También se han probado el vector lentiviral EFEWP bajo el control del promotor del factor de elongación 1-alfa (EF1α) y el vector CEWP bajo el promotor de citomegalovirus (CMV). Sorprendentemente, se ha encontrado que la introducción de los CAR resultantes en células T primarias indica que sólo el vector lentiviral que contiene el promotor AWE de SEQ ID NO 1 sigue de cerca la expresión del TCR. Es importante destacar que, a diferencia de los otros promotores analizados (EF1α, CMV), el promotor AWE no incrementó los niveles de expresión del transgén después de la activación del TCR, lo que es especialmente relevante para reducir la intensidad del síndrome de liberación de citoquinas (CRS). Por lo tanto, la presente invención proporciona polinucleótidos y vectores virales para la transfección de una célula hospedadora mamífera, que codifican el CAR descrito anteriormente y un promotor del locus del síndrome de Wiskott-Aldrich, en particular, el promotor de SEQ ID NO 1, vinculado operativamente al CAR para impulsar su expresión.