Estudio del proteoma de las líneas celulares de alta virulencia (c8c3hvir) y de baja virulencia (c8c3lvir) del clon h510 c8c3 de trypanosoma cruziools

Abstract

Trypanosoma cruzi es el agente etiológico de la enfermedad de Chagas, que en sus formas crónicas se caracteriza por la afectación cardíaca y digestiva. Teniendo en cuenta que el repertorio molecular del parásito modula su virulencia y repercute en el curso clínico de la enfermedad de Chagas, este estudio pretende determinar el mecanismo subyacente a la patogenicidad de T. cruzi. Para ello, se utilizaron trypomastigotes derivados de cultivo celular (TDCC) de dos líneas celulares de T. cruzi, la de alta virulencia C8C3hvir y la de baja virulencia C8C3lvir, obtenidas del clon H510 C8C3, para infectar ratones. La infectividad de las líneas celulares se evaluó realizando curvas de parasitemia. Los proteomas de ambas líneas celulares de T. cruzi se compararon mediante nLC-MS/MS. Además, se evaluaron los niveles de expresión de la cruzipaína (Czp), proteína reguladora del complemento (CRP), transialidasas (TS), Tc85 y epítopos sialilados en TDCC de C8C3hvir y C8C3lvir mediante inmunowestern blot. La línea celular C8C3hvir de alta virulencia fue altamente infectiva para ratones, incluso cuando factores de virulencia como Czp, TS y CRP fueron inhibidos mediante el uso de oligonucleótidos antisentido. Se identificaron un total de 1547 proteínas por medio de proteómica cuantitativa comparativa, siendo, 387 de ellas reguladas diferencialmente en C8C3hvir con respecto a C8C3lvir. Entre ellas, 174 y 216 estaban reguladas al alza y a la baja en C8C3hvir y C8C3lvir, respectivamente. La línea celular C8C3hvir mostró una regulación al alza en las enzimas del ciclo del ácido tricarboxílico (TCA), las proteínas ribosomales y las redoxinas. Los inmunoblots mostraron que C8C3hvir expresaba mayores niveles de Czp, CRP, TS, Tc85 y epítopos sialilados que C8C3lvir. Los TDCC de la línea C8C3hvir no sólo expresaron de forma diferente algunos factores de virulencia en relación con el C8C3lvir, sino que también presentaron vías metabólicas reguladas. Por lo tanto, parece que la virulencia de T. cruzi no sólo está relacionada con la expresión de factores de virulencia (como Czp, CRP, TS) sino también con la regulación de las vías bioenergéticas y biosintéticas.

Trypanosoma cruzi is the etiological agent of Chagas disease, which in its chronic forms is characterized by cardiac and digestive involvement. Considering that the molecular repertoire of the parasite modulates its virulence and has an impact on the clinical course of Chagas disease, this study aims to determine the mechanism underlying the pathogenicity of T. cruzi. Two T. cruzi cell lines, high virulence C8C3hvir and low virulence C8C3lvir, obtained from clone H510 C8C3, were used to infect mice. The infectivity of the cell lines was assessed by performing parasitemia curves. The proteomes of both T. cruzi cell lines were compared by nLC-MS/MS. The expression levels of cruzipain (Czp), complement regulatory protein (CRP), transialidases (TS), Tc85 and sialylated epitopes in cell culture-derived trypomastigotes of C8C3hvir and C8C3lvir were evaluated by immunoblotting. The highly virulent C8C3hvir cell line was highly infective to mice, even inhibiting virulence factors such as Czp, TS and CRP. A total of 1547 proteins were identified by comparative quantitative proteomics, being, 387 differentially regulated in C8C3hvir with respect to C8C3lvir. Among them, 174 and 216 were up- and down-regulated in C8C3hvir and C8C3lvir, respectively. The C8C3hvir cell line showed up-regulation of tricarboxylic acid (TCA) cycle enzymes, ribosomal proteins and redoxins. Immunoblots showed that C8C3hvir expressed higher levels of Czp, CRP, TS, Tc85 and sialylated epitopes than C8C3lvir. C8C3hvir not only differentially expressed some virulence factors relative to C8C3lvir, but also exhibited up-regulated metabolic pathways. Therefore, it appears that T. cruzi virulence is not only related to the expression of virulence factors (such as Czp, CRP, TS) but also to the regulation of bioenergetic and biosynthetic pathways