Influencia de diferentes ácidos orgánicos y aminoácidos sobre a determinación de succinato por la succinato deshidrogenasa de mitocondria de hígado de rata

Abstract

Se ha estudiado la determinación enzimática de succinato en muestras biológicas mediante la succinato deshidrogenasa de mito­condria de hígado de rata. La enzima conserva su actividad a -20°C durante varios días. Se han utilizado como reacciones acopladas la reducción de violeta de p-yodol1iJrotetrazolio 'y la reducción del ferricianuro. En este último caso la reacción tiene poca sensibilidad ya que sólo 'cumple la ley de Lambert elevadas concentraciones de succinato'. Se ha estudiado el efecto de los ácidos oxalacético, málico, fumárico y malónico ' solos o en presencia de succinato, variando las proporciones relativas de ambos (0.1, 1, 10 y 100 veces la concentra ción de succinato). Todos ellos presentan un carácter inhibidor por lo que interfieren en la determinación enzimática del succinato. Por otra parte se ha ensayado el efecto de los aminoácidos aspártico, glutámico, 4-aminobutírico y glutamina en las mismas condiciones. Sólo el glutámico ejerce un marcado efecto activador de la reacción, pudiendo llegar hasta un 100% de incremento de los valores de D.O. observada. De los demás aminoácidos ensayados, el aspártico es un fuerte inhibidor, mientras que los restantes prácticamente no influyen. Por ello creemos imprescindible la separación previa de los aminoácidos presentes en la muestra a valorar para evitar interferencias en, el sistema de determinación.

Succinate from biological samples have been enzymatically determined by rat liver succinate dehydrogenase. The enzyme· is active for 6-8 days kept at -20°C. Colorimetric determination ,of ferricyanide or p-iodonitrotetrazolium violet has been used. The sensitivity of the first method is lesser than the second. Oxalacetic, malic fumaric and malonic acids have been tested as interfering reaction, as cell as the aminoacids aspartic, glutamic, 4-aminobutyric and glutamine. Glutamic acid shows a clear activator effec.+. even at 0.1 foId Succinate concentration. Therefore the aminoacids pres,ents in ,the biological Samples must been eliminat'ed before succinate determination,