Papel de TCERG1 en la integridad de los cuerpos de Cajal y en la biogénesis de los snRNPs

Abstract

TCERG1 es una proteína implicada en la transcripción y el splicing de los mRNAs y en el acoplamiento funcional de ambos procesos. En esta tesis doctoral, hemos descubierto una nueva función para esta proteína: TCERG1 regula la homeostasis de los cuerpos de Cajal (CBs) y la biogénesis de las ribonucleoproteínas nucleares pequeñas (small nuclear ribonucleoprotein, snRNPs), partículas imprescindibles para el proceso de splicing del pre-mRNA. Este estudio se inició con la identificación de la región de TCERG1 responsable de la unión con NOLC1, una fosfoproteína nucleolar componente de los CBs. Hemos identificado que los dominios FF4 y FF5 de TCERG1 son los responsables de la interacción entre TCERG1 y NOLC1 y que la inhibición de TCERG1 afecta a la localización de NOLC1 en los CBs nucleares pero no a su localización en el nucléolo. En relación a los CBs, mostramos que la inhibición de TCERG1 afecta la integridad de estos orgánulos ya que su proteína marcadora, la coilina, con la que interacciona TCERG1, se dispersa por el nucleoplasma en numerosos pequeños gránulos. Este efecto es específico de TCERG1, ya que los CBs pueden formarse de nuevo tras la reexpresión controlada de TCERG1. Además, la inhibición de TCERG1 no parece afectar de forma prominente a otros orgánulos nucleares como los speckles, gems o HLB. Paradójicamente, el efecto de disgregación de los CBs puede ser observado también con la sobreexpresión saturante de TCERG1. En esta tesis, hemos identificado también un papel importante de TCERG1 en la biogénesis de los snRNPs. Hemos observado que la inhibición de TCERG1 afecta la unión de las proteínas Sm a los RNAs pequeños nucleares ricos en uridinas (snRNAs), unión necesaria para formar el complejo snRNP maduro. La formación de este complejo tras la inhibición de TCERG1 se ve también disminuida al monitorizar la expresión de una proteína de fusión GFP-SmB. El papel de TCERG1 en la formación del complejo Sm-snRNP no parece implicar un efecto sobre la transcripción de los snRNAs dado que, en las condiciones experimentales usadas, los niveles de los snRNAs endógenos no están disminuidos. La interacción de TCERG1 con factores implicados en la biogénesis de los snRNPs, como CRM1, Int11 o SMN, refuerzan un posible papel de TCERG1 en este proceso. Nuestros datos indican que TCERG1 juega un papel importante en la homeostasis de los CBs y en el ensamblaje de los complejos Sm-snRNAs durante la biogénesis de los snRNPs.