Modificación del patrón de metilación del ADN en el proceso de diferenciación neuronal de células madre mesenquimales
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Hernández Pérez, RosaEditorial
Universidad de Granada
Departamento
Universidad de Granada. Programa de Doctorado en BiomedicinaMateria
Patrón de metilación del ADN Diferenciación neuronal Células madre mesenquimales DNA methylation pattern Neuronal differentiation Mesenchymal stem cells
Fecha
2021Fecha lectura
2021-12-01Referencia bibliográfica
Hernández Pérez, Rosa. Modificación del patrón de metilación del ADN en el proceso de diferenciación neuronal de células madre mesenquimales. Granada: Universidad de Granada, 2021. [http://hdl.handle.net/10481/72066]
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Tesis Univ. Granada.Resumen
Las lesiones en el sistema nervioso central (SNC) y los trastornos
neurodegenerativos agudos constituyen la tercera causa de muerte más frecuente en
Europa y Estados Unidos, solo por detrás del cáncer y las enfermedades
cardiovasculares. Sin embargo, todavía no existen tratamientos eficaces para sustituir
las células nerviosas dañadas. La medicina regenerativa propone el trasplante de células
madre obtenidas de distintas fuentes y diferenciadas in vitro como un método
prometedor de reparación del tejido neuronal, y son muchos los estudios clínicos que
avalan su eficacia. No obstante, la aplicación clínica de esta metodología es muy
reducida, debido sobre todo a la incapacidad actual de garantizar su bioseguridad a largo
plazo. Este estudio pretende implementar un protocolo eficaz de inducción neuronal in
vitro y profundizar en el estudio de los cambios epigenéticos que tienen lugar durante la
diferenciación neuronal, en el afán de conocer mejor cuáles son los acontecimientos
moleculares que tienen lugar en la célula y conseguir así prever el comportamiento de
éstas una vez trasplantadas al paciente.
Las células madre mesenquimales (MSCs) adultas derivadas de tejido adiposo
(hASCs) ofrecen importantes ventajas prácticas frente a otros tipos de células madre en
su potencial aplicación clínica, ya que pueden obtenerse en grandes cantidades,
cultivarse y expandirse fácilmente, y presentan muy bajo riesgo de desarrollar
neoplasias malignas. En este trabajo se emplearon células madre humanas obtenidas de
tejido adiposo (hASCs), concretamente de lipoaspirados, cedidos previo consentimiento
firmado por pacientes del hospital La Salud de Granada. Tras ser aisladas siguiendo un
protocolo de extracción estándar, que incluye una digestión del tejido con colagenasa
tipo I, las células fueron caracterizadas por citometría de flujo. Se obtuvieron
porcentajes superiores al 98% para los marcadores mesenquimales CD73, CD105 y
CD90 e inferiores al 2% para los marcadores hematopoyéticos CD45, CD34 y CD133.
Este hecho confirmó que el experimento partía de un cultivo homogéneo de hASCs. Central nervous system lesions and acute neurodegenerative disorders are the
third most frequent cause of death in Europe and the United States, only behind cancer
and cardiovascular diseases. However, there are still no effective treatments to replace
the cells from the damaged nerves. Regenerative medicine proposes the transplant of
stem cells obtained from different sources and differentiated in vitro as a promising
method of tissue repair, with many clinical studies supporting its effectiveness.
Nevertheless, the clinical application of this methodology is very limited, mainly due to
the current inability to guarantee its biosecurity in the long term. This study aims to
implement an effective in vitro neuronal induction protocol and carry out a thorough
study of the epigenetic changes that take place during neuronal differentiation, in order
to better understand the molecular events that take place in the cell and thus to
anticipate its behavior once transplanted to the patient.
Adult mesenchymal stem cells (MSCs) derived from adipose tissue (hASCs)
offer important practical advantages over other types of stem cells when it comes to
their potential clinical application, since they can be obtained in large quantities, easily
cultured and expanded and they present a very low risk of developing malignant
neoplasms. In this work, hASCs obtained from lipoaspirates, under a signed consent,
were donated by patients of the La Salud hospital in the city of Granada. After being
isolated following a standard extraction protocol that includes tissue digestion with type
I collagenase, the cells were characterized by flow cytometry. Percentages higher than
98% were obtained for the mesenchymal markers CD73, CD105 and CD90 and less
than 2% for the hematopoietic markers CD45, CD34 and CD133. This fact confirmed
that the experiment started from a homogenous culture of hASCs.