Perfil lipídico y péptidos con actividad biológica en la leche materna

Abstract

En esta Tesis Doctoral se han realizado estudios encaminados a evaluar el estado nutricional durante el embarazo y la posible influencia tanto del índice de masa corporal de la madre como la fase de la lactancia en la composición de la leche materna. En primer lugar, se ha llevado a cabo un estudio de la composición corporal de mujeres embarazadas residentes en la provincia de Granada durante el primer trimestre de embarazo mediante el uso de medidas antropométricas. Además, se ha determinado la adherencia a la dieta mediterránea y se ha estimado la ingesta de nutrientes mediante un cuestionario de frecuencia de consumo de alimentos durante ese mismo periodo. Este estudio pone de manifiesto que las mujeres embarazadas no han alcanzado algunas recomendaciones establecidas para esta etapa de la vida. La composición de la dieta en cuanto a macronutrientes no era adecuada según las recomendaciones y también se han encontrado ingestas inadecuadas de varios micronutrientes que son relevantes durante el embarazo. En segundo lugar, se han estudiado los principales cambios en el perfil de ácidos grasos de muestras de leche materna recogidas en diferentes momentos de la lactancia y se han comparado con distintas fórmulas infantiles. Para ello, se han determinado los ácidos grasos mediante cromatografía de gases acoplada a espectrometría de masas (GC-MS/MS), encontrándose diferencias significativas entre las muestras de leche materna y las fórmulas infantiles, principalmente en ácidos grasos esenciales (α-linolénico) y ácidos grasos poliinsaturados de cadena larga (DHA y EPA). Además, se pone de manifiesto que la leche materna se trata de un fluido dinámico y cambiante con el tiempo. En tercer lugar, se han llevado a cabo un estudio del perfil proteico y peptídico de la leche materna, simulando la digestión gastrointestinal en condiciones del lactante. se ha caracterizado el perfil de proteínas mediante espectrometría de masas MALDI-TOF, demostrando ser una herramienta con una alta eficacia para asociar el perfil proteico de la leche con la composición corporal de la madre. Seguidamente, se ha empleado un modelo in vitro para evaluar la degradación de las proteínas y la liberación de péptidos. Mediante la aplicación de técnicas como la electroforesis en gel de poliacrilamida, SDS-PAGE y la cromatografía líquida de alta eficacia (UPLC), se ha observado que durante la fase gástrica existe una alta resistencia de las proteínas más abundantes del suero humano, α-lactolbúmina y lactoferrina al contrario de lo que ocurre con las caseínas, especialmente la β-caseína que se hidrolizan en gran medida debido a su estructura flexible. En cambio, la digestión intestinal da lugar a una rápida hidrólisis de las proteínas intactas que quedaban tras la fase gástrica. Estos datos son similares a los observados in vivo. Los péptidos identificados en los digeridos de la leche materna mediante cromatografía líquida acoplada a espectrometría de masas (HPLC–MS/MS) pertenecieron a veinte proteínas diferentes, encontrándose noventa secuencias habían sido identificadas previamente en digestiones de recién nacidos tras el consumo de leche materna. Las principales bioactividades asociadas a estos péptidos fueron antioxidantes, opioides, inmunomoduladoras, antimicrobianas y antibacterianas; y se identificaron con predominio de las tres proteínas más abundantes, como son la β-caseína, lactoferrina y α-lactoalbúmina, coincidiendo total o parcialmente con péptidos bioactivos descritos en la bibliografía, incluso encontrados en digeridos in vivo. El último objetivo ha sido estudiar el perfil de compuestos fenólicos individuales en muestras de leche materna de diferentes etapas de la lactancia y fórmulas infantiles mediante un método de cromatografía líquida acoplada a espectrometría de masas (UPLC-MS/MS). Se han conseguido cuantificar 26 compuestos fenólicos (diez ácidos hidroxibenzoicos, siete ácidos hidroxicinámicos, cuatro flavonoides, tres hidroxibenzaldehídos y otros dos compuestos fenólicos), encontrándose que la leche materna contiene el doble de compuestos fenólicos individuales que las fórmulas infantiles, con una mayor proporción de ácidos hidroxibenzoicos. Algunos de estos compuestos fenólicos no habían sido descritos previamente en leche materna. Por el contrario, las fórmulas infantiles mostraron una mayor proporción de ácidos hidroxicinámicos. Por último, se ha estudiado el contenido total de compuestos fenólicos mediante el ensayo de Folin-Ciocalteu y la actividad antioxidantecon los ensayos DPPH, ABTS y FRAP. La leche materna ha demostrado tener mayor contenido en compuestos fenólicos totales, encontrando sólo pequeñas variaciones entre las diferentes etapas de la lactancia. Sin embargo, las fórmulas infantiles han mostrado una mayor capacidad antioxidante para el ensayo DPPH y ABTS.