Caracterización de Agarosas Tipo I y Tipo VII para su uso en Ingeniería Tisular

Abstract

Objetivos: El objetivo del presente trabajo es el desarrollo de un nuevo protocolo para la inclusión de geles de agarosa en parafina que permita su estudio en histología, y la posterior caracterización de dos tipos distintos de agarosa, Tipo I y Tipo VII, para su uso en Ingeniería Tisular. Métodos: Se evaluaron distintos protocolos que permitiesen un correcto procesamiento de los geles de agarosa permitiendo obtener cortes de dichos geles incluidos en parafina. Una vez optimizado el protocolo, se realizó una caracterización de las agarosas tipo I y VII para su utilización en Ingeniería Tisular. Para ello se obtuvieron geles de agarosa de ambos tipos a concentraciones del 2% y 2.5%, y en cuyo interior había condrocitos. Se evaluó la permeabilidad de la membrana celular mediante la medida por espectrofotometría del ADN liberado al medio, el tamaño celular de los condrocitos cultivados y el estado celular mediante inmunohistoquímica frente a PCNA y Vimentina. También se realizó un estudio sobre la resistencia a la compresión que presentan los distintos geles con el paso del tiempo. Resultados: Tres de los protocolos propuestos hacían posible el procesamiento de los geles y permitieron la caracterización de los distintos tipos de agarosa. En este caso, el estudio de las agarosas tipo I y VII ha demostrado que los condrocitos crecen correctamente en ambos tipos de agarosas, pero que la tipo VII favorece el desarrollo de los mismos frente a la Tipo I. Además, la agarosa pierde elasticidad con el paso de los días soportando a la vez menos fuerza de compresión. Conclusiones: El Protocolo propuesto para el procesamiento y posterior inclusión de geles de agarosa en parafina en este trabajo permite realizar histología en los mismos, y ha permitido confirmar que la agarosa tipo VII favorece el desarrollo y supervivencia celular.

Purpose: The objective of the present work is the development of a new protocol for the inclusion of paraffinembedded agarose gels to allow their study in histology and the subsequent characterization of two different types of agarose, Type I and Type VII, for their use in Tissue Engineering. Method: Different protocols were evaluated for a correct processing of the agarose gels allowing to obtain cuts of paraffin-embedded agarose gels. Once the protocol was optimized, a characterization of type I and VII agarose was performed for their use in tissue engineering. For this purpose, agarose gels of both types were obtained at concentrations of 2% and 2.5%, and in which chondrocytes were present. The permeability of the nuclear membrane was measured by spectrophotometry of the DNA released, the cell size of the cultured chondrocytes and the cellular state by immunohistochemistry against PCNA and Vimentin. A study on the compressive strength of different gels over time was also performed. Results: Three of the proposed protocols allowed the processing of the gels and allowed the characterization of the different types of agarose. In this case, the study of the type I and VII agarose has shown that chondrocytes grow correctly in both types of agarose, but type VII favors the development of the same against Type I. In addition, the agarose loses elasticity with the day pass while supporting less compressive force. Conclusions: The proposed protocol for the processing and subsequent inclusion of paraffin-agarose gels in this work allows the histology to be carried out in the same ones, and has allowed to confirm that type VII agarose favors the development and cellular survival.