Detección de carbapenemasas en Pseudomonas aeruginosa mediante espectometría de masas MALDI-TOF MS

Abstract

Introducción: Las bacterias gramnegativas, especialmente Pseudomonas, presentan con frecuencia resistencia a múltiples antibióticos incluyendo carbapenemes. La resistencia a carbapanemes se ha incrementado en los últimos años causada por alteraciones de membrana o por la producción de carbapenemasas. Objetivo: Valorar la utilización de la espectrometría de masas MALDI-TOF MS® para la detección de carbapenemasas clase A o B en Pseudomonas aeruginosa. Material y métodos: Partiendo de 12 aislados de Pseudomonas aeruginosa productoras de carbapenemasas clase A o B identificados mediante método de difusión disco-placa, tipificadas usando los discos: meropenem 10µg, meropenem 10µg + ácido borónico, meropenem 10µg + cloxacilina y meropenem 10µg + ácido dipicolínico (Rosco Diagnostica), hemos analizado posibles picos de hidrólisis del meropenem tras la acción de las carbapenemasas mediante espectrometría de masas MALDI-TOF MS®. Como controles negativos se utilizaron 25 cepas de Pseudomonas aeruginosa sensibles a meropenem y 8 cepas de Pseudomonas aeruginosa con impermeabilidad de membrana, no detectables mediante la metodología utilizada. Resultados: De las 12 cepas productoras de carbapenemasas clase A o B, (2/12 clase A, 10/12 clase B), la técnica de espectrometría de masas MALDI-TOF MS® detectó picos de degradación del antibiótico en estudio correspondientes a la presencia de carbapenemasas en 11/12 casos (94.4%). En las cepas usadas como controles negativos, la espectrometría de masas MALDI-TOF MS® indicó la ausencia de carbapenemasas clase A o B en 31/33 (93.9%) casos. Conclusión: La espectrometría de masas MALDI-TOF MS® puede ser una herramienta útil para la confirmación de carbapenemasas clase A y B en Pseudomonas aeruginosa.

Introduction: Gram-negative bacteria especially Pseudomonas are resistance to multiple antibiotics including carbapenems. Carbapanemes resistance has increased in recent years caused by alterations of membrane or the production of carbapenemases. Objective: Assess the use of MALDI-TOF MS® mass spectrometry for the detection of carbapenemases class A or B in Pseudomonas aeruginosa. Material and methods: From isolated from Pseudomonas aeruginosa producing carbapenemases 12 class A or B identified by diffusion method disco-plate, classified using disks: meropenem 10μg, meropenem 10μg + boronic acid, meropenem 10μg + cloxacillin and meropenem 10μg + acid dipicolinic (Rosco Diagnostica), we analyzed possible hydrolysis of meropenem peaks after the action of the carbapenemases by MALDI-TOF MS® mass spectrometry. As negative controls were used 25 strains of Pseudomonas aeruginosa sensitive to meropenem and 8 strains of Pseudomonas aeruginosa with waterproof membrane, not detectable by the methodology used. Results: Of the 12 strains producing carbapenemases class A or B, (2/12 class A, 10/12 class B), MALDI-TOF MS® mass spectrometry technique detected peaks of degradation of the antibiotic in study to the presence of carbapenemases in 11/12 cases (94.4%). The strains used as controls negative, MALDI-TOF MS® mass spectrometry indicated the absence of carbapenemases class A or B at 31/33 cases (93.9%). Conclusion: MALDI-TOF MS® mass spectrometry can be a useful tool for the confirmation of carbapenemases class A and B in Pseudomonas aeruginosa.