Validación del método analítico para la determinación de glimepirida en plasma humano por HPLC/UV con adición de estándar empleando glibenclamida como estándar interno

Abstract

Se desarrolló un método para la detección y cuantificación de Glimepirida en plasma humano, con elución isocrática por cromatografía líquida de fase reversa, con detección ultravioleta a 231 nm, empleando el método de adición de estándar. Se utilizó Glibenclamida como estándar interno. Este método involucra una extracción líquida de los principios activos (Glimepirida y Glibenclamida) usando una mezcla de diclorometano:dietiléter (30:70 v/v). La separación se realizó en una columna C18 en fase reversa y la fase móvil consistió de una mezcla de acetonitrilo:agua (45:55 v/v) ajustado a pH 3.3±0.1 con ácido acético glacial. El método se validó en el rango de concentraciones de 0.001 a 1.0 μg/mL con adición de estándar de Glimepirida de 0.25 μg/mL. La curva de calibración fue lineal en el rango de concentraciones establecido. Se evaluó la reproducibilidad, estabilidad y porcentaje de recuperación del método. El método para la determinación de Glimepirida en plasma humano por HPLC/UV fue preciso y exacto, con un límite de cuantificación de 0.2025 μg/mL. Este método fue suficientemente sensible para su aplicación en estudios farmacocinéticos de glimepirida.

A method for detection and quantification of Glimepiride in human plasma has been developed using an isocratic elution on reversed phase liquid chromatography with ultraviolet detection at a single wavelength (231 nm) and the addition standard method. Glibenclamide was used as an internal standard. This method involves a liquid-liquid drug extraction (Glimepiride and Glibenclamide) from plasma using dichloromethanediethyl ether (30:70%v/v). Separation was achieved on a C18 reversed phase column and the mobile phase consisted of 45% acetonitrile and 55% water (adjusted to pH 3.3±0.1 with acetic acid glacial). The assay has been validated over a concentration range of 0.001 to 1.0 μg/mL with addition of Glimepiride 0.25 μg/mL. Calibration curve was linear in the described concentration range. The reproducibility, stability and recovery of the method were evaluated. Determination of Glimepiride in human plasma by HPLC/ UV method was accurate and precise with a quantitation limit of 0.2025 μg/mL. The method was sufficiently sensitive for pharmacokinetic studies of Glimepiride in human plasma.