FQM302 - Miscelánea

Propuesta de una nueva metodología para el control de residuos de benzimidazoles mediante cromatografía de líquidos capilar.

Propuesta de una nueva metodología para el control de residuos de benzimidazoles mediante cromatografía de líquidos capilar. Escolano Gálvez, M. Dolores Se propone una nueva metodología para el control de residuos de benzimidazoles mediante cromatografía de líquidos capilar. Estos compuestos son antihelmíticos. Se utilizan como agentes antiparasitarios en animales y algunos como plaguicidas en agricultura. La legislación vigente establece unos LMRs para alimentos de origen animal y vegetal que no se pueden sobrepasar para un consumo seguro. Sim embargo en las aguas no existen legislados LMRs aunque debe tenderse a contemplar concentraciones muy bajas en estas muestras. * El establecimiento del método de cromatografía de líquidos capilar ha requerido la optimización de parámetros que afectan a la calidad de separación. La elección de los valores óptimos se ha realizado con el objetivo de conseguir la máxima resolución y eficacia de los picos en el menor tiempo posible para la separación cromatográfica. Una vez establecidos los parámetros se procedió al establecimiento de la recta de calibrado con patrones. * Se han evaluado dos tratamientos de muestra para la extracción de los analitos en estudio en muestras de agua de piscifactoría: la DLLME y SALLE, ambos rápidos y de bajo coste, con la mínima utilización de disolventes. Sin embargo SALLE nos otorgaba mejores resultados que DLLME. Mediante la DLLME no se conseguía la extracción de los dos analitos más polares. Sin embargo, mediante la técnica SALLE se consiguió la extracción de todos los analitos de manera reproducible. * Al realizar la validación del método con muestra de agua de piscifactoría se obtienen resultados satisfactorios, con bajos LDs para los 17 analitos elegidos. * El método de cromatografía de líquidos capilar propuesto acoplado a SALLE como tratamiento de muestra (SALLE-CLC-DAD) presenta como ventajas su facilidad, rapidez y eficacia, bajo consumo de disolventes y adecuada precisión. Ha demostrado ser una alternativa sencila para el control de residuos de benzimidazoles en aguas medioambientales y su aplicación podría ser ampliada a otras matrices siempre que se combine con los tratamientos de muestra adecuados.

Determinación de drogas de abuso empleadas en sumisión química mediante cromatografía líquida capilar

Determinación de drogas de abuso empleadas en sumisión química mediante cromatografía líquida capilar Álvarez González, Elena En los últimos años, el fenómeno de Sumisión Química (SQ) ha cobrado gran interés, siendo las drogas de abuso las más empleadas como arma, sobre todo en fenómenos de asalto sexual. Las catinonas sintéticas pertenecen a una familia de drogas ampliamente usadas con estos fines, debido a sus propiedades y al vacío legal que existe para algunos compuestos de esta familia, empleándose habitualmente en presencia de otras drogas, sobre todo en presencia de cocaína.La orina, la sangre y la saliva son las muestras biológicas más analizadas en el campo de la SQ debido a la facilidad de recogida de muestra y conservación de las mismas. Sin embargo, debido a la dificultad de las víctimas para recordar lo ocurrido, a la baja permanencia de muchas drogas en el organismo y a la gran variedad de sustancias que se emplean, está cobrando gran interés el análisis de este tipo de drogas en restos de bebidas encontradas en la escena del delito, pues el análisis de estas muestras puede ser clave para la resolución de un caso. En los laboratorios forenses se necesitan técnicas de rutina económicas para la determinación de este tipo de sustancias en una amplia variedad de muestras. La tendencia actual es recurrir a desarrollar métodos alternativos empleando técnicas miniaturizadas que van a consumir menos muestras y reactivos, por lo que, presentando las mismas prestaciones, serán más compatibles con la Química Verde. Teniendo en cuenta estas necesidades y el interés que los laboratorios forenses están mostrando en su aplicabilidad a muestras alimentarias, el objetivo de esta memoria es poner a punto un método de detección y cuantificación de dos catinonas sintéticas en presencia de una de las drogas de consumo más frecuentes, como es la cocaína, mediante una técnica miniaturizada de cromatografía líquida capilar (HPLC-capilar) y como sistema de detección la detección UV-Vis, muy poco estudiada en el campo de la Toxicología Forense y asequible para cualquier los laboratorio de rutina, para la determinación de catinonas sintéticas y cocaína en diferentes bebidas alcohólicas, que es la forma más común de ingesta de estas drogas para delitos de SQ. Por otro lado, debido a la complejidad de las muestras biológicas, para llevar a cabo el análisis de estas drogas en muestras de orina es necesario emplear tratamientos de muestra muy eficaces, ya que hay que alcanzar límites de detección muy bajos (del orden de los μg/L). Por ello, se ha decidido llevar a cabo unos estudios de tratamiento de muestra preliminares para extrapolar el método desarrollado al análisis de los mismos compuestos en muestras de orina, ya que estos tratamientos no son necesarios emplearlos en las bebidas estudiadas y su conocimiento es de vital importancia en el campo de la Toxicología Alimentaria y Forense. Estos objetivos se han llevado a cabo con la siguiente metodología: * Selección de drogas de abuso objeto de estudio: contactando con los laboratorios forenses para realizar la selección de las drogas en base a la mayor demanda actual. * Desarrollo de un método empleando la cromatografía líquida capilar con detección UV-Vis. * Evaluación del tratamiento de muestra más adecuado para el análisis de las catinonas sintéticas y cocaína en bebidas alcohólicas. * Caracterización de la metodología de análisis propuesta para el análisis de drogas de abuso en diferentes bebidas alcohólicas. * Ensayos preliminares para la aplicación de la metodología desarrollada a muestras de orina.

Comparativa de dos metodologías analíticas usando cromatografía de líquidos para la determinación de residuos de benzimidazoles

Comparativa de dos metodologías analíticas usando cromatografía de líquidos para la determinación de residuos de benzimidazoles Reche Ramírez, María del Pilar Los benzimidazoles son antiparasitarios internos que se usan comúnmente para el control de gusanos endoparásitos del ganado bovino, ovino, caprino, porcino y de las aves, así como desparasitantes para perros y gatos. Son empleados en la agricultura para el control de nematodos parásitos de diversos cultivos y también presentan propiedades fungicidas, por lo que son empleados durante el almacenaje y transporte de fruta y verdura. Debido a su uso, estas sustancias pueden aparecer como residuos tanto en alimentos de origen animal como en vegetales, pudiendo provocar efectos adversos para la salud. Es por ello que la cantidad máxima de residuo de estos compuestos en alimentos está legislada en la Unión Europea de modo que superar esos límites constituye un delito contra la salud. Por ello es necesario disponer de métodos analíticos para la determinación sensible y selectiva de estos compuestos en diversas matrices alimentarias. En este sentido, el objeto de este trabajo fin de grado consiste en la evaluación y comparación de dos metodologías analíticas para su control, usando la cromatografía de líquidos capilar y la cromatografía de líquidos de ultra-alta resolución.

Evaluación de la microextracción líquido-líquido dispersiva para la determinación de patulina en zumos de manzana mediante electroforesis capilar

Evaluación de la microextracción líquido-líquido dispersiva para la determinación de patulina en zumos de manzana mediante electroforesis capilar Víctor-Ortega, María Dolores Patulin (PAT) is a mycotoxin produced in fruits by several Penicillium and Aspergillus species, especially Penicillium expansum. Its occurrence as a natural contaminant of fruit juices is an indicative of fruit quality in production [1]. The maximum content of patulin has been established by the EU by the Directive (CE) Nº 1881/2006 in 50 μg·kg-1 for fruit juices. In this work, dispersive liquid–liquid microextraction (DLLME) has been proposed for the extraction and preconcentration of PAT in apple juice samples, followed by its determination by micellar electrokinetic chromatography (MEKC) with diode-array detection. DLLME is a novel environmentally friendly sample preparation technique, showing important advantages because it is fast, inexpensive, easy to operate with a high enrichment factor and consumes low volume of organic solvents. This method is based on a ternary component solvent system in which the extraction solvent and disperser solvent are rapidly injected into the aqueous sample containing the analyte, using a syringe. The mixture is then gently shaken and a cloudy solution (water/disperser solvent/extraction solvent) is formed in the test tube. After centrifugation, the fine particles of extraction solvent are sedimented in the bottom of a conical test tube and the analyte can be directly analyzed or this phase can be evaporated and reconstituted in the appropriate solvent before analysis [2]. In this work PAT has been analyzed in the presence of 5-hydroxymethylfurfural (HMF) (main interference in apple juice PAT analysis) using an extended light path fused-silica capillary (64.5 cm × 75 μm I.D., 56 cm effective length) and an electrophoretic buffer consisting of borate/HCl 35 mM at pH 9.0, sodium dodecyl sulphate (SDS) 65 mM and acetonitrile 5%. Samples were introduced by hydrodynamic injection (50 mbar, 17 s), dissolved in water at pH 4.0, acidified with an aqueous acetic acid solution [3]. Variables affecting DLLME efficiency were optimized, selecting: 5 mL of sample solution, 1000 μL of chloroform as extraction solvent, 1000 μL of 2-propanol as disperser solvent and 20% (w/v) of NaCl. The sedimented phase was evaporated to near dryness using a stream of nitrogen and reconstituted with 0.5 mL of water at pH 4. The solution was filtered and injected into the electrophoretic system. Under these conditions, a very clean extract was obtained. Following this treatment, sample throughput was approximately 10 samples per hour, obtaining a preconcentration factor of 10. Calibration curve was established for PAT in apple juice samples, applying the DLLME-MECK procedure. LOD (obtained as 3xS/N) was 0.64 μg·L-1 and LOQ (obtained as 10xS/N) was 2.14 μg·L-1. The precision of the method was evaluated in terms of repeatability and intermediate precision and the result was acceptable (RSD < 10%). Recoveries obtained for spiked apple juice samples at four different concentration levels (5, 20, 50 and 75 μg·L-1), were above 75% with RSD lower than 9%. From the results, DLLME has shown to be a very easy, fast, efficient and green extraction procedure, in comparison with conventional alternatives for PAT analysis. Combined with the advantages of capillary electrophoresis, it could provide a very useful method for the analysis of PAT in fruit juices in routine laboratories. [1] E. M.S.M. Gaspar, A. F.F. Lucena. Food Chem. 114 (2009) 1576-1582 [2] C. Bosch Ojeda, F. Sánchez Rojas. Food Control 18 (2007) 530–534. [3] M. Murillo, E. González-Peñas, S. Amézqueta, Food Chem. Toxicol. 46 (2008) 57–64.

Desarrollo de un método de cromatografía capilar electrocinética micelar para la determinación de 5-nitroimidazoles en aguas de río

Desarrollo de un método de cromatografía capilar electrocinética micelar para la determinación de 5-nitroimidazoles en aguas de río Hernández Mesa, Maykel 5-nitroimidazoles (5-NDZs) represent a group of antibiotics with antiprotozoal and antibacterial properties. Some of them, as metronidazole, tinidazole and ornidazole, are used in human medicine, although they have had veterinary applications too. Since 90’s, the use of 5-NDZs in food-producing animals is forbidden by the European Union because these compounds and their metabolites possess genotoxic, carcinogenic and mutagenic properties. In this sense, Commission Regulation N. 37/2010 establishes that no residue of any 5-NDZs can be found in animals products intended for human consumption. However, they are still used as veterinary antibiotics according to the food alerts published in the Rapid Alert System for Food and Feed (RASFF) portal. Besides, 5-NDZs and their metabolites are very soluble in water and their biodegradability is low, so their presence in fish-farm water and meat industry effluents can produce their bioaccumulation. Considering that the capacity of current water treatment systems to remove antibiotics is low, 5-NDZs can be an environmental problem too. In this work we propose Micellar Electrokinetic Chromatography (MEKC) for the simultaneous determination of residues of 5-NDZs and their degradation products: metronidazole, metronidazole-OH, dimetridazole, dimetridazole-OH, ipronidazole, ipronidazol-OH, ternidazole, secnidazole, ronidazole and ornidazole. The separation takes place in around 20 min. The optimum conditions for an effective separation have been established: phosphate 20 mM, pH 6.5 with sodium dodecyl sulphate (SDS) 150 mM as electrophoretic buffer; applying a voltage of 25 kV at 20ºC. The sample, dissolved in phosphate buffer 20 mM pH 6.5, is introduced by hydrodynamic injection (50 mbar, 15 s) The compounds were monitored at 320 nm. An extended light path fused-silica capillary (64.5 cm × 50 μm I.D., 56 cm effective length) was used. Due to the lack of sensitivity inherent to capillary electrophoresis with UV–detection, a simple solid-phase extraction (SPE) method has been applied for off-line preconcentration and cleanup of water samples using Oasis HLB cartridges, achieving a preconcentration factor of 50. The performance characteristics of the method have been established, obtaining detection limits in the low ng/mL, which makes this method very useful for monitoring of these residues in different water samples, with recoveries over 90%, and satisfactory precision.