@misc{10481/110762,
year = {2015},
month = {7},
url = {https://hdl.handle.net/10481/110762},
abstract = {Background

Targeted lentiviral vectors may contribute to circumventing genotoxicity associated with uncontrolled transcription of therapeutic genes. Some vectors replacing strong viral sequences for gene promoters such as β-globin, CD4, CD19 or Igκ were able to drive tissue-specific expression of the transgene. Gene therapy, however, faces even greater hurdles when the therapeutic transgene is subject to strict regulatory mechanisms. This is the case of the CD40LG gene, which encodes for the CD154 (also known as CD40L) molecule, transiently expressed upon activation on CD4+ T cells. Mutations in this gene cause the X-linked hyper IgM syndrome (HIGM1) in humans because the interaction of CD40L with its ligand CD40 triggers signals that are critical for the immunobiology of B lymphocytes.
Methods

We developed a lentiviral vector containing the murine Cd40lg cDNA under the control of its endogenous promoter.
Results

The CD4+ BW5147 T cells transduced with the pCd40lg-Cd40lg lentiviral vector express CD40L only upon stimulation. The intensity of the expression correlates with the number of vector integrations per cell and detected molecules rapidly decay after removing the stimulating agent. The tissue-specific, activation-dependent and reversible expression of CD40L fully mimics the physiological induction and disappearance of the molecule from the surface of murine T lymphocytes. The functional activity of the regulated lentiviral vector is demonstrated by the ability of transduced BW5147 cells to promote the proliferation of purified B cell splenocytes.
Conclusions

We have developed a fine-regulated lentiviral vector that can be a model for expressing molecules subject to stringent regulatory mechanisms. Copyright © 2015 John Wiley & Sons, Ltd.},
abstract = {Los vectores lentivirales dirigidos pueden contribuir a evitar la genotoxicidad asociada a la transcripción incontrolada de genes terapéuticos. Algunos vectores que sustituyen secuencias virales fuertes por promotores génicos como β-globina, CD4, CD19 o Igκ fueron capaces de impulsar la expresión específica del transgén en los tejidos. Sin embargo, la terapia génica se enfrenta a obstáculos aún mayores cuando el transgén terapéutico está sujeto a estrictos mecanismos reguladores. Este es el caso del gen CD40LG, que codifica la molécula CD154 (también conocida como CD40L), expresada de forma transitoria tras la activación de las células T CD4(+). Las mutaciones en este gen causan el síndrome de hiper-IgM ligado al cromosoma X (HIGM1) en humanos, ya que la interacción de CD40L con su ligando CD40 desencadena señales que son fundamentales para la inmunobiología de los linfocitos B. Desarrollamos un vector lentiviral que contiene el ADNc murino Cd40lg bajo el control de su promotor endógeno. Las células T CD4(+) BW5147 transducidas con el vector lentiviral pCd40lg-Cd40lg expresan CD40L solo tras la estimulación. La intensidad de la expresión se correlaciona con el número de integraciones del vector por célula y las moléculas detectadas se descomponen rápidamente tras retirar el agente estimulante. La expresión reversible, dependiente de la activación y específica del tejido de CD40L imita completamente la inducción fisiológica y la desaparición de la molécula de la superficie de los linfocitos T murinos. La actividad funcional del vector lentiviral regulado se demuestra por la capacidad de las células BW5147 transducidas para promover la proliferación de esplenocitos de células B purificados. Hemos desarrollado un vector lentiviral finamente regulado que puede servir de modelo para expresar moléculas sujetas a estrictos mecanismos reguladores.},
organization = {Andalusian Health Service  SAS111218},
organization = {The children's medical charity 12UDG01-ATF from Sparks},
organization = {Sparks grant},
publisher = {Wiley},
keywords = {Transcriptional targeting},
keywords = {HIGM1},
keywords = {CD40L},
title = {Regulated expression of murine CD40L by a lentiviral vector transcriptionally targeted through its endogenous promoter},
doi = {10.1002/jgm.2837},
author = {Fernández-Rubio, Pablo and Torres Rusillo, Sara and Molina Pineda de las Infantas, Ignacio J.},
}