@misc{10481/106777,
year = {2025},
url = {https://hdl.handle.net/10481/106777},
abstract = {La microbiota vaginal desempeña un papel fundamental en la salud ginecológica al actuar
como barrera protectora frente a infecciones. Las alteraciones en este ecosistema pueden
derivar en afecciones como la vaginosis bacteriana (VB), la vulvovaginitis candidiásica (VVC) y la
tricomoniasis, que representan las principales causas de vaginitis infecciosa. Estas condiciones
no solo impactan significativamente la calidad de vida de las pacientes, sino que también se
asocian con complicaciones obstétricas y un mayor riesgo de contraer infecciones de
transmisión sexual (ITS).
Este trabajo presenta el diseño, desarrollo y validación de un test molecular basado en la
técnica de PCR en tiempo real para el diagnóstico de las principales causas de vaginitis. El test
diseñado permite la detección simultánea, mediante un formato de PCR multiplex, de los
microorganismos que forman parte de la microbiota, Lactobacillus spp. (L. crispatus, L. jensenii,
L. iners y L. gasseri), y los patógenos clave involucrados en estas infecciones: Gardnerella
vaginalis, Fannyhessea vaginae, Candida albicans, C. glabrata, C. albicans, C. krusei, Candida
spp. (C. parapsilosis, C. tropicalis y C. dubliniensis) y Trichomonas vaginalis.
Para el diseño del test, en base a bibliografía y alineamientos de genomas, se identificaron
los microorganismos clínicamente relevantes y se seleccionaron dianas genéticas altamente
conservadas para el diagnóstico. Se diseñaron oligonucleótidos y sondas TaqMan específicas
para cada diana, optimizando las condiciones de reacción hasta alcanzar una sensibilidad y
especificidad óptimas inicialmente en formato singleplex para posterior aplicación en formato
multiplex. Durante el desarrollo del test, se evaluaron diversos reactivos de PCR y métodos de
extracción. Se seleccionó el master mix, kit de extracción y protocolo de amplificación que
generó el mejor rendimiento.
Se desarrolló un algoritmo propio para el diagnóstico de VB, que pretende establecer una
clasificación de la microbiota vaginal similar a la que proporciona el método de Nugent (gold
standard) en base a la cantidad de Lactobacillus frente a la cantidad de G. vaginalis y F. vaginae
presente en la muestra. Este algoritmo alcanzó un AUC de 0,950, con una sensibilidad del 93% y
una especificidad del 90,4%.
Para demostrar la validez científica y el desempeño analítico y clínico del método, se realizó
una validación interna conforme a los criterios establecidos en el Reglamento (UE) 2017/746
para la comercialización de productos sanitarios de diagnóstico in vitro (IVD) en la Unión
Europea (marcado CE). Esta validación incluyó el análisis del límite de detección, precisión, sensibilidad y especificidad diagnóstica, reactividad cruzada, inclusividad y estabilidad del
método para su uso con muestras de exudado vaginal de origen humano. Además, se evaluó la
integración del test con sistemas automatizados, como el MagXtract® 3200 System, y su
compatibilidad con equipos de amplificación, como el CFX96™ Real-Time PCR Detection System
y el Azure Cielo™ 6 Real-Time PCR System. Los resultados obtenidos del análisis de estos
parámetros confirmaron el adecuado funcionamiento analítico y clínico del test.
Una vez obtenida la certificación CE, se llevó a cabo una evaluación externa que incluyó la
comparación con métodos de diagnóstico tradicionales y otros basados en técnicas de
amplificación de ácidos nucleicos (NAAT). El análisis del desempeño del test Vaginal Panel
Realtime PCR kit frente a estos métodos demostró que ofrece un rendimiento clínico
equiparable para el diagnóstico de VB, VVC y tricomoniasis.
En conclusión, este trabajo describe el diseño, desarrollo y validación del test Vaginal Panel
Realtime PCR Kit que representa un avance significativo en el diagnóstico de vaginitis,
proporcionando una herramienta rápida, precisa y confiable para el manejo clínico. Su
implementación en la práctica clínica permite mejorar la atención a las pacientes, reducir
complicaciones y optimizar las estrategias terapéuticas.},
organization = {Tesis Univ. Granada.},
organization = {Vircell S.L.},
publisher = {Universidad de Granada},
title = {Diagnóstico molecular de la vaginitis: Desarrollo y validación de un test de PCR a tiempo real para la identificación de los principales agentes causantes de vaginitis infecciosa},
author = {Amor Mateo, María Isabel},
}