Síndrome de Wiskott - Aldrich: Modelos celulares humanos para esudios preclínicos de vectores lentivirales para terapia génica

Abstract

El síndrome de Wiskott-Aldrich es una inmunodeficiencia primaria ligada al cromosoma X causada por mutaciones en el gen WAS, afectando a todo el linaje hematopoyético. La expresión de WAS está regulada por dos promotores; promotor proximal, de 1.6Kb, situado justo en el sitio de inicio de la transcripción y el promotor proximal o distal, de 0.6Kb, situado a 6Kb aguas arriba del promotor proximal. El gen WAS, de expresión específica de linaje hematopoyético, codifica una proteína multimodular citoplasmática (WASP) cuya función más estudiada es la integración de señales extracelulares con la nucleación de la actina y la reorganización del citoesqueleto celular. Sin embargo el rol de WASP en el linaje megacariocítico resulta controvertido con evidencias que indican una función más especializada de WASP en plaquetas. Actualmente el único tratamiento curativo para pacientes con WAS es el trasplante de médula ósea. Sin embargo, este tratamiento no está siempre disponible ni está exento de efectos secundarios severos. Por ello, la terapia génica (TG) emerge como una alternativa real al trasplante alogénico de progenitores hematopoyéticos. En la actualidad, se están llevando a cabo diferentes ensayos clínicos de TG para el tratamiento de pacientes con WAS utilizando células madre hematopoyéticas (HSCs) modificadas genéticamente con un vector lentiviral (VL) que expresa el gen WAS a través del promotor proximal del propio gen WAS (el vector lentiviral WW1.6). A pesar de que la gran mayoría de los pacientes se han recuperado de la inmunodeficiencia y manifestaciones autoinmunes, en muchos casos persiste la microtrombocitopenia y en algunos casos también los sangrados y hemorragias. Las razones de que esta estrategia repare con éxito los defectos funcionales de células T, B y macrófagos (causantes de la inmunodeficiencia), pero no tenga el mismo éxito en plaquetas son desconocidas. Una hipótesis es que los vectores lentivirales utilizados (WW1.6), consiguen una expresión adecuada de WASP en células linfoides y mieloides pero no en las células del linaje megacariocítico. Esto produciría una “peor” expresión de WASP en megacariocitos y plaquetas y, por tanto, unos peores resultados en cuanto a reparación de los defectos funcionales de las mismas. Estos problemas de eficiencia en la restauración de la trombocitopenia no fueron detectados en los modelos animales utilizados en los ensayos preclínicos, reflejando la necesidad de desarrollar nuevos modelos para estos estudios. En base a lo mencionado anteriormente, la presente tesis se ha centrado en los siguientes objetivos: 1- Estudiar el papel de WASP durante la megacariopoyesis y a la trombopoyesis en células humanas. Esto permitirá entender los resultados de los ensayos clínicos actuales y los requerimientos para mejorar dichos resultados, 2- Analizar si el patrón de expresión de los vectores terapéuticos mimetizan la expresión endógena de WASP durante estos dos procesos. De esta manera se podrá investigar donde está el problema de los vectores actuales y como mejorarlos y 3– Desarrollar nuevos vectores terapéuticos e investigar la capacidad de los mismos para reparar los defectos funcionales de los megacariocitos y plaquetas, así como de otros tipos celulares linfoides y mieloides. La idea final es proponer una nueva estrategia de TG para WAS basada en nuevos VLs que muestren mejores perfiles de expresión en el linaje megacariocítico y mantengan la capacidad de restauración de los defectos funcionales encontrados en las células hematopoyéticas de los pacientes con WAS.