Identificación mediante MLPA (Multiplex Ligation-Dependent probe Amplificcation) de las deleciones y duplicaciones de la Distrofia Muscular de Duchenne en varones afectados y mujeres portadoras pertenencientes a la población andaluza

Abstract

Las últimas estimaciones acerca del porcentaje de enfermedades genéticas incluidas bajo esta definición informan de que al menos un 75% de las enfermedades raras tendrían este origen. La DMDB es considerada como una enfermedad rara, actualmente se estima que la prevalencia es de 5 por cada 100000 habitantes. Las distrofias musculares de Duchenne y Becker (DMDB) son las entidades clínicas de origen genético más frecuentes entre las denominadas distrofinopatías, que se producen por alteraciones de la proteína distrofina esencial para la interacción entre el citoesqueleto de la fibra muscular y la matriz extracelular. Son entidades clínicas caracterizadas por el devastamiento físico y mental que producen en los afectados y su carácter hereditario. Es de vital importancia dilucidar en los estudios familiares la mutación causante de la patología y el mecanismo de transmisión con el objeto de realizar un adecuado consejo genético en cada caso. Las mujeres portadoras, transmiten la mutación a su descendencia con una probabilidad del 50%. Desde el punto de vista socio-sanitario el diagnóstico y tratamiento de una “enfermedad rara” supone cerca del 20% de los ingresos anuales de una familia afectada, y estos gastos se reparten entre la adquisición de medicamentos y otros productos sanitarios (50%), el tratamiento médico (43%), las ayudas técnicas y de ortopedia (30%), el transporte adaptado (27%), la asistencia personal (23%) y la adaptación de la vivienda (9%). Se estima que el coste que pacientes y familiares deben afrontar en la DMDB es de 94171 €, siendo esta cifra muy superior a las estimadas para otras enfermedades raras como el Síndrome de X Frágil (59824 €), el Síndrome de Prader Willi (57772€), la Fibrosis Quística (37343€), la Histiocitosis (30537€), la esclerodermia (18288€), la Epidermolisis Bullosa (33903€) y la hemofilia (19746€) (López J et al., 2012). El gen responsable de la enfermedad se localiza en el brazo corto del cromosoma X (Xp21), tiene un tamaño de 2.4 Mb y está integrado por un total de 79 exones. Es una enfermedad con transmisión ligada al cromosoma X, por tanto esta patología afecta a los varones, mientras que las mujeres son portadoras y transmisoras (patrón de herencia recesivo ligado a sexo). La incidencia en los distintos estudios es de 1:3500 en caso de Duchenne y 1:18000 en caso de Becker de entre todos los recién nacidos vivos varones. En 2014 Mah (Mah et al., 2014) realiza un análisis de los datos de prevalencia de DMDB (4.78 y 1.53 por 100000 para DMD y DMB respectivamente), concluyendo que no se pudo realizar un análisis de la incidencia de la misma por la escasez y disparidad de datos obtenidos. Estudios sobre la incidencia en España y, en especial, en Andalucía siguen siendo una asignatura pendiente; por lo que los datos que actualmente se siguen manejando corresponden a los obtenidos por Emery en 1991 (Emery AE, 1991). Los datos recogidos en Orphanet en 2014 estiman la prevalencia mundial en 5 por 100000 para DMD, no hay datos para DMB. Se han descrito en la literatura 4000 variaciones conocidas del gen DMD. La mayoría de las mutaciones identificadas son deleciones (65-85%), duplicaciones (5-10%) o mutaciones puntuales (25-30%) (4, 5, 6, 7) entre las que se incluyen deleciones de pequeño tamaño, inserciones y mutaciones puntuales. Las deleciones se producen con mayor probabilidad en dos zonas exónicas conocidas como “zonas calientes”: la comprendida entre los exones 44 al 53 y, en segundo lugar, la comprendida entre los exones 2 al 20. Desde el año 1987 se conoce que la mayoría de las mutaciones causantes de la enfermedad de Duchenne se localizan, no de forma aleatoria, sino en 18 regiones preferentes del gen. El análisis de estas regiones usando distintos métodos (southern-blot, PCR cuantitativa, Multiplex Amplificable Probe Hybrydisation -MAPH- o hibridación in situ fluorescente) permite detectar alteraciones en solo un 20-30% de los 79 exones del gen DMD. El desarrollo reciente de la Múltiplex Ligation dependent Probe Amplification (MLPA), técnica más empleada para el estudio de casos índice y de portadoras, permite la detección de deleciones y duplicaciones en todos los exones del gen DMD. Sin embargo, es importante confirmar la deleción de un único exón porque pueden existir mutaciones de pequeño tamaño (polimorfismos de un solo nucleótido (SNP´s), mutaciones puntuales) que pueden originar un falso positivo para la deleción usando la técnica de MLPA. Haldane en 1935 afirma que un tercio de los pacientes afectados de DMD/DMB lo son por mutaciones de novo esporádicas en familia sin historia previa y esta proporción depende del sexo del paciente. Es crucial determinar si la mutación de un paciente es de novo o ha sido heredada de su madre para ofrecer el asesoramiento genético adecuado en cada caso.