Caracterización bioquímica y funcional del factor de transcripción y splicing PRPF40B

Abstract

Esta tesis aporta conocimientos básicos sobre la proteína con dominios WW y FF menos conocida hasta la fecha, PRPF40B, un homólogo humano del factor esencial de splicing en levaduras Prp40. Nuestros experimentos muestran la localización nucleoplasmática de PRPF40B y su enriquecimiento en los speckles nucleares, así como los dominios estructurales más relevantes responsables de su distribución. También hemos identificados importantes interacciones con factores de splicing que relacionan a PRPF40B con las etapas iniciales de este proceso. Asimismo, hemos realizado ensayos funcionales de splicing que muestran que PRPF40B es capaz de regular el splicing alternativo de genes apoptóticos, como Fas, y analizado secuencias necesarias para desempeñar dicho papel. Basándonos en los resultados con el gen Fas, hemos observado que el silenciamiento de PRPF40B incrementa el número de receptores de membrana Fas/CD95 y aumenta la muerte celular por apoptosis. Mediante un análisis global del transcriptoma humano en células de neuroblastoma SH-SY5Y bajo condiciones de silenciamiento de PRPF40B hemos revelado que este factor está involucrado en rutas de cáncer, y en señalización y transporte en el sistema nervioso. Partiendo de los datos generados y realizando ensayos funcionales, mostramos que PRPF40B es capaz asimismo de activar la transcripción. Además hemos demostrado que mutaciones asociadas al síndrome mielodisplásico disminuyen drásticamente la capacidad de activación transcripcional de PRPF40B.