Estudio de algunas características de los plasmidos no simbióticos de rhizobium meliloti gr4 :análisis genético -molecular de la producción de melanina ligada al prmegr4b , y de la estabilidad y replicación del prmegr4a

Abstract

Se abordo el estudio de los dos plasmidos no simbióticos de la cepa gr4 de rhizobium meliloti: prmegr4a y prmegr4b. se trata de uno de los primeros intentos sistemáticos de caracterizar funciones en estos elementos genéticos extracromosómicos de tipo críptico, los plásmidos son extraordinariamente estables, lo que sugiere que podrían codificar funciones importantes para la supervivencia de la bacteria hospedadora bajo determinadas circunstancias. con este trabajo se ha podido determinar que la producción de melanina esta ligada a la presencia del prmegrb, y que existen en estos plásmidos, al menos en prmegr4a, unos mecanismos de replicación y de estabilidad que, aunque podrían estar emparentados con los del ti de agrobacterium tumefaciens, parecen propios e incluso poco relacionados con los de otros plásmidos típicos de los grupos de incompatibilidad estudiados hasta la fecha. en el prmegr4b se ha localizado el locus responsable de la producción de melanina, en un fragmento psti de 3,5 kb., y se identificado y secuenciado el gen de la tirosinasa correspondiente. su secuencia proteica muestra dominios bien conservados en otras tirosinasas y proteínas afines, así como de hemocianinas, que son responsables de union a cobre. se ha logrado la expresión del gen de esta tirosinasa en escherichia coli de forma independiente del sistema regulador rpon/nifa. se ha aislado el replicon mínimo de prmegr4a responsable de la replicación y mantenimiento (4,8 kb), y donde se ha localizado y secuenciado un gen (repc) cuyo producto es imprescindible para la replicación, y que muestra ciertas homologias con genes repc de agrobacterium. se pusieron a punto plásmidos vectores de clonado