Determinación cuantitativa de indigotina e indirubina en el índigo natural mediante cromatografía líquida de alto rendimiento (HPLC)

Abstract

Se desarrolló un método de cromatografía líquida de alto rendimiento cuantitativa y de separación utilizando una columna RP-18 eluida isocráticamente con metanol y agua (73:27, v/v) para analizar los compuestos activos isoméricos indigotina e indirubina presentes en el extracto de cloroformo del índigo natural. Se utilizaron soluciones estandarizadas de indigotina e indirubina para evaluar la linealidad, la precisión (replicabilidad), la exactitud y la especificidad del método. Los resultados mostraron una linealidad (r2 > 0,999) de entre 1,8 y 16,2 μg/ml para la indigotina y entre 1,6 y 14,4 μg/ml para la indirubina. También se obtuvo un alto grado de especificidad, robustez, replicabilidad (desviación estándar relativa inferior al 5% para estándares y extractos) y exactitud (% de recuperaciones superior al 95%).

A high-performance liquid chromatographic separation and quantitative method using a RP-18 column eluted isocratically with methanol and water (73:27, v/v) was developed to analyze the isomeric active compounds, indigotin and indirubin, present in the chloroform extract of indigo naturalis. Standardized solutions of indigotin and indirubin were used to evaluate linearity, precision (repeatability), accuracy and specificity of the method were evaluated. The results exhibited a linearity (r2 > 0.999) of between 1.8 - 16.2 μg/ml and 1.6 - 14.4 μg/ml for indigotin and indirubin, respectively. A high degree of specificity and robustness, as well as repeatability (relative standard deviation less than 5% for both standards and the extracts) and accuracy (% recoveries greater than 95%) were also achieved.